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《一夜七次郎小课堂》猪场进行非瘟检测时,确诊的判断依据是什么?

2020-09-08 09:28:13来源:网络作者:浏览:次 分享:

参考答案:核酸检测结果

核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找动物淋巴结、血液或脾脏等组织器官是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被病毒感染(人的新冠病毒检测和猪的非瘟病毒检测原理是一致的)。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明动物体内有病毒存在。所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒,非瘟病毒是一种双链DNA病毒。

检测非瘟病毒和新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR(qPCR)。在PCR反应体系中,荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高, Ct值越小。样本来源包括:

样本采集时应注意穿戴个人生物安全防护装备,实施现场消毒和废弃物处理。

1)活猪:血液,扁桃体液等液体样品。

2)病死猪:脾、肺、肾、淋巴结、肌肉等组织样品。

3)周边环境:饲料、车辆、粪便、污水、栏舍等均周边环境样品。

病毒核酸提取

病毒核酸提取前,一般血液、扁桃体液等液体样品不需处理,直接用病毒核酸提取试剂盒提取样品gDNA,对于耐抑制性能较强的qPCR试剂,也可以直接取液体样品进行下游qPCR实验。但组织样品在进行病毒核酸提取前,需要进行研磨裂解处理。

qPCR检测

qPCR检测步骤包括配制qPCR反应体系和加样上机检测。每次检测试验都需要设立阳性对照和阴性对照组。具体操作可参照所用qPCR试剂盒说明书。

结果分析(不同企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值)

1、质控标准

1)阴性对照的Ct值应>38或无Ct值。

2)阳性对照的Ct值应≤35,并出现典型的扩增曲线。

3)若阴性和阳性对照不满足以上条件,此次实验视为无效。

2、样品结果判定

1)阴性:检测样品的Ct值>38或无Ct值,表明样品为阴性。

2)阳性:检测样品的Ct值≤35,且出现典型的扩增曲线,表示样品为阳性。

3)可疑:检测样品的35<Ct值≤38,且出现典型的扩增曲线,应重检,重检仍出现上述结果的判为阳性,否则判为阴性。

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